Caracterización bacteriológica de muestras superficiales de suelo contaminado con HTP, provenientes de Santa Margarita

Abstract

1. INTRODUCCIÓN ........................................................................................................... 1

2. ANTECEDENTES .......................................................................................................... 2

2.1 Características de los HTP .......................................................................................... 4

2.1.2 HTP en el ambiente ............................................................................................... 5

2.1.2 Efectos tóxicos de los HTP en el ambiente ............................................................ 6

2.2 Biorremediación de ambientes contaminados con HTP ............................................ 6

2.3.2 Técnicas de biorremediación In situ ................................................................... 8

2.4 Factores que influyen en la biorremediación ........................................................... 10

2.4.1 Fundamento bioquímico de la biodegradación de HTP .................................... 11

2.4.2 Degradación de fracciones de HTP ................................................................. 11

2.5 Fases de crecimiento microbiano: Cinética microbiana .......................................... 12

2.5.1 Fase de retraso o latencia ............................................................................... 13

2.5.2 Fase logarítmica o exponencial ....................................................................... 13

2.5.3 Fase estacionaria ............................................................................................ 13

2.5.4 Fase declinación o muerte ..................................................................................14

2.6 Suelo ................................................................................................................ 14

2.6.1 Microbiota de suelos contaminados con hidrocarburos .................................... 16

2.6.2 Importancia de la caracterización de bacterias degradadoras de HTP ............. 17

2.7 Bacterias degradadoras de HTP ............................................................................. 18

2.7.1 Género Pseudomonas ..................................................................................... 18

2.7.2 Género Acinetobacter ...................................................................................... 19

2.7.3 Género Bacillus ............................................................................................... 20

2.7.4 Hongos y Levaduras ........................................................................................ 20

3. JUSTIFICACIÓN .......................................................................................................... 22

4. HIPÓTESIS .................................................................................................................. 23

5. OBJETIVOS ................................................................................................................. 24

4.1 Objetivo general. .................................................................................................... 24

4.2 Objetivos particulares. ........................................................................................ 24

6. METODOLOGÍA ........................................................................................................... 25

6.1 Material de laboratorio necesario para el desarrollo de la experimentación. ........... 25

6.1.1 Insumos utilizados durante todo el proceso ..................................................... 25

6.1.2 Reactivos y soluciones .................................................................................... 25

6.1.3 Equipo e instrumentación para el procesamiento y análisis de muestras. ........ 26

6.1.4 Medios de cultivo para enriquecimiento, crecimiento y aislamiento.................. 26

6.2 Pre-tratamiento del material para recolección, cultivo y almacenamiento de muestras de suelo

6.3 Estandarización de medios de cultivo mediante la prueba ecométrica ................... 27

6.3.1 Procedimiento de la prueba ecométrica ........................................................... 27

6.4.2 Interpretación de resultados de la prueba ecométrica ...................................... 28

6.4.5 Zona de Estudio .............................................................................................. 29

6.5 Recolección de las muestras de tierra .................................................................... 30

6.6 Procesamiento de las muestras de tierra ................................................................ 30

6.6.1 Conteo de células viables en las muestras de tierra recolectadas ................... 31

6.6.2 Recuperación, aislamiento e identificación microbiológica en las muestras de tierra recolectada

6.7 Preservación y refrescamiento de las cepas recuperadas. ..................................... 33

6.7.1 Preservación de las cepas en refrigeración. .................................................... 33

6.7.2 Preservación de las cepas por congelamiento ................................................. 33

6.7.3 Refrescamiento de cepas refrigeradas o congeladas ...................................... 33

6.8 Cinética de crecimiento en medios de cultivo con HTP........................................... 34

6.8.1 Cinética de prueba en medio mineral con glucosa ........................................... 34

6.8.2 Inoculación y pre-adaptación del pool de microorganismo ............................... 35

6.8.3 Cinética del crecimiento bacteriano ................................................................. 35

6.8.4 Cuantificación del crecimiento mediante D.O.600 .............................................. 36

6.8.5 Cinéticas de crecimiento con residuos de HTP en medio mineral .................... 37

6.9 Pruebas rápidas de crecimiento en catecol y hexano ............................................. 37

7. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ..................................................................................... 39

7.1 Estandarización medio de cultivo (Prueba Ecométrica) .......................................... 39

7.1.1 Resultados de estandarización en Agar MacConkey ....................................... 39

7.1.2 Resultados de estandarización en Agar Cetrimida ........................................... 40

7.1.3 Resultados de estandarización en Agar Mueller-Hinton ................................... 42

7.1.4 Resultados de estandarización en Agar Dextrosa Papa .................................. 43

7.2 Conteo de células viables en las muestras de tierra ............................................... 44

7.2 Aislamiento e identificación microbiológica de las muestras recolectadas de suelo 47

7.2.1 Morfología en Agar MacConkey ....................................................................... 47

7.2.2 Morfología en Agar Cetrimida .......................................................................... 49

7.2.3 Morfología en Agar Dextrosa Papa .................................................................. 51

7.3 Cinéticas de crecimiento microbiano con las cepas recuperadas ........................... 53

7.3.1 Cinética de crecimiento en glucosa al 2% W/V como fuente de carbono ......... 53

7.3.2 Cinética de crecimiento con HTP 2% V/V como fuente de carbono ................. 55

7.4 Pruebas rápidas de crecimiento microbiano en medio mineral en catecol y hexano como fuentes de carbono

8. CONCLUSIONES ................................................................................................... 63